Cách pha ống McFarland
I. MỤC ĐÍCH Mô tả quy trình cho nhân viên phòng nuôi cấy về cách làm kháng sinh đồ theo phương pháp khoanh giấy khuếch tán Kirby – Bauer. II. PHẠM VI ÁP DỤNG Quy trình này áp dụng cho các nhân viên phòng nuôi cấy, khoa Vi sinh, Bệnh viện đa khoa tỉnh Quảng Ninh. III. TÀI LIỆU VIỆN DẪN
IV. TRÁCH NHIỆM Nhân viên xét nghiệm khoa vi sinh- Bệnh viện đa khoa tỉnh Quảng Ninh có trách nhiệm thực hiện theo đúng quy trình Người thực hiện: cán bộ xét nghiệm đã được đào tạo và có chứng chỉ hoặc chứng nhận về chuyên nghành vi sinh, làm việc tại khoa Vi sinh- Bệnh viện đa khoa tỉnh Quảng Ninh V.ĐỊNH NGHĨA, THUẬT NGỮ, CHỮ VIẾT TẮT Giải thích thuật ngữ
Từ viết tắt
VI. NGUYÊN LÝ Khoanh giấy có đường kính và độ dày nhất định, vô trùng, đã tẩm sẵn kháng sinh với nồng độ nhất định (dựa vào hiệu lực của từng kháng sinh) được đặt lên đĩa môi trường đã nuôi cấy vi khuẩn. Sauk hi ủ ấm ở nhiệt độ và khí trường thích hợp, vi khuẩn chỉ mọc được ở nơi có nồng độ kháng sinh thấp hoặc không có. Tùy theo khả năng ức chế sự phát triển của vi khuẩn mà tạo ra vùng ức chế xung quanh khoanh giấy kháng sinh, dựa vào đường kính vùng ức chế ta xác định được mức độ nhạy cảm của vi khuẩn được thử với kháng sinh VII. TRANG THIẾT BỊ VÀ VẬT TƯ Thiết bị
Dụng cụ
Hóa chất, thuốc thử
- Đĩa thạch Muller-Hinton thường có đường kính 90 mm (cho vi khuẩn dễ mọc: vi khuẩn đường ruột, Acinetobacter, Pseudomonadaceae ...) và máu (cho vi khuẩn khó mọc: liên cầu, phế cầu, Listeria, Neisseria ...). - Khoanh giấy kháng sinh. VIII. NỘI DUNG Bệnh phẩm
Kỹ thuật tiến hành Pha huyền dịch vi khuẩn
+ Trên mặt thạch phân lập, chọn ít nhất từ ba đến năm khuẩn lạc vi khuẩn giống nhau và tách rời. Dùng que cấy chạm vào đầu mỗi khuẩn lạc vi khuẩn rồi cấy chuyển vào 4 đến 5ml môi trường lỏng thích hợp như tryptic soy broth. + Ủ canh cấy lỏng này ở 370 C cho đến khi đạt được hay hơn độ đục chuẩn MacFarland 0,5 (thường từ 2 đến 6 giờ). Huyền dịch vi khuẩn như vậy có chứa khoảng 1 - 2 x 108 CFU/ml. + Dùng môi trường lỏng hay nước muối sinh lý vô khuẩn để điều chỉnh độ đục của canh cấy vi khuẩn đang tăng trưởng này đến độ đục chuẩn MacFarland 0,5 bằng máy đo độ đục.
Cũng thuận tiện như phương pháp tăng sinh, có thể pha huyền dịch vi khuẩn trong môi trường lỏng hay trong nước muối sinh lý trực tiếp từ các khuẩn lạc vi khuẩn mọc trên mặt thạch nuôi cấy đã ủ 18 đến 24 giờ (nên dùng môi trường thạch không chọn lọc, như thạch thường hoặc thạch máu). Điều chỉnh huyền dịch vi khuẩn đạt độ đục chuẩn MacFarland 0,5 như trình bày ở phần trên. Trải huyền dịch vi khuẩn trên mặt thạch
Đặt khoanh giấy kháng sinh lên mặt thạch đã ria vi khuẩn
Ủ đĩa thạch trong tủ ấm
IX. DIỄN GIẢI KẾT QUẢ
X. KIỂM TRA CHẤT LƯỢNG Môi trường cơ bản thực hiện kháng sinh đồ là thạch Muller-Hinton và phải đảm bảo yêu cầu sau:
Các khoanh giấy kháng sinh phải đảm bảo:
- Chỉ sử dụng các khoanh giấy kháng sinh cßn hạn dùng, loại bỏ các khoanh giấy kháng sinh quá hạn. Dùng các chủng chuẩn khi tiến hành song song làm KSĐ: - Với các chủng trực khuẩn Gram âm dễ mọc dùng chủng E. coli ATCC 25922 và chủng P. aeruginosa ATCC 27853. - Với các cầu khuẩn Gram dương dễ mọc dùng các chủng S. aureus ATCC 25923 Vi khuẩn đặc biệt
Một số lỗi mắc phải trong phương pháp kháng sinh khuếch tán
XI. AN TOÀN
XII. HỒ SƠ LƯU
XIII. TÀI LIỆU LIÊN QUAN
|